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Dead Cell Removal Solution
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很多细胞实验中对单细胞悬液质量要求很高，包括细胞活性、有核率等参数，若悬液的细胞活性较低，会导致有效细胞识别不准确、有效细胞及非细胞界限模糊、捕获细胞数过高或过低，背景升高等不利现象。
百奥益康团队累积了10,000+个样本的单细胞测序服务经验，涉及150+种不同类型的组织，具有丰富的新鲜组织解离的经验。在此基础上，百奥益康自主研发了死细胞去除缓冲液，利用该试剂盒，可高效的去除单细胞悬液中的死细胞，提高悬液质量。
产品优势
适用范围：哺乳动物单细胞悬液中死细胞的快速高效去除。
性能表现：可快速、高效的去除单细胞悬液中的死细胞，大幅度改善单细胞悬液质量，从而获得该高质量的数据结果。
应用场景：适用于含有大量死细胞的细胞悬液优化，可应用于高通量单细胞测序、细胞培养或其他细胞相关检测相关科学研究实验。
经验丰富：基于超过10,000个样本、150余种组织类型的组织解离经验开发而成，历经多年实验验证。
测试效果
我们对新鲜的小鼠肾脏组织进行了实验，结果显示，使用死细胞去除缓冲液处理后，单细胞悬液的细胞活率参数明显提升，从39.67%提升至93.72%。从数据分析结果可以看出，处理之后，测得的基因中位数明显改善，从537提升至2594。
测试流程：
测试结果：
利用死细胞去除缓冲液处理单细胞悬液前后样本质检结果
使用死细胞去除缓冲液处理单细胞悬液前后样本细胞直径分布
使用死细胞去除缓冲液处理单细胞悬液前后样本测序数据结果
产品宣传页
点击下载：百奥益康死细胞去除缓冲液产品宣传页（货号：BA3338）
产品说明书
点击下载：百奥益康死细胞去除缓冲液使用说明书（货号：BA3338）
订购信息
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产品名称
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产品货号 | 产品规格 | 目录价格 |
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死细胞去除缓冲液
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BA3338-10
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10 rxns | ¥1,699 |
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BA3338-40
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40 rxns | ¥6,199 |
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产品 FAQ
1. Q：处理高死细胞率（＞50%）的肿瘤组织单细胞悬液时，离心后发现活细胞层（上层液体）中仍夹杂大量死细胞，死细胞去除率仅 60%，远低于预期的 90%，是什么原因导致的？该如何优化操作？
A：高死细胞率样本中死细胞易聚集形成团块，随活细胞上浮。优化方法：①步骤 2 重悬细胞时，用含 2% FBS 的 1640 反复吹打 20 次，确保死细胞团块分散；②铺层前将混合液通过 20μm 细胞筛过滤 1 次，去除＞20μm 的死细胞团；③离心时将转速从 700×g 提高至 750×g，延长离心时间至 25 分钟，增强死细胞沉降效果，可使死细胞去除率提升至 85% 以上。
2. Q：按步骤将 1mL 混合液（细胞悬液 + DCRS）铺在 2mL DCRS 上层时，液体沿管壁快速流下，导致两层立即混合，无法形成清晰分层，该如何控制铺层速度避免混层？
A：混层多因铺层时液体冲击力度过大。解决方法：①选择 1mL 低吸附枪头，将枪头尖端贴近 2mL DCRS 液面（距离＜1mm）；②缓慢推动枪头推杆，控制液体流速（1mL 混合液铺层时间≥30 秒），避免液体冲击管壁；③若使用 15mL 离心管，可先将离心管倾斜 45°，沿倾斜管壁缓慢滴加混合液，待液体沿管壁流至 DCRS 表面后再放平试管，可使分层成功率提升至 95%。
3. Q：离心后观察到溶液仅分成 2 层（上层液体、下层沉淀），未出现中间过渡层，且活细胞回收率仅 50%，是什么原因导致分层不完整？该如何调整离心参数？
A：分层不完整多因离心机加速度 / 减速度未设为 “居中”，或离心温度偏差。调整方法：①确认离心机参数：加速度 “5”、减速度 “5”（居中档位），若离心机无数字档位，选择 “中等” 模式，避免高速升降速破坏分层；②离心温度严格控制在 4℃（温差 ±1℃），温度过高会降低 DCRS 密度差；③补加 0.5mL DCRS 至下层，重新铺层离心，可使分层完整度恢复。
4. Q：步骤 5 用含 5% FBS 的 PBS 稀释至 10mL 后，4℃、450×g 离心 5 分钟，发现活细胞沉淀松散，弃上清时约 30% 细胞随上清流失，该如何获得致密沉淀？
A：沉淀松散因哺乳动物活细胞表面含黏附分子，相互排斥难以聚集。解决方法：①将离心转速提高至 500×g，离心时间延长至 8 分钟；②稀释时在 10mL PBS 中加入 50μL 1% 多聚赖氨酸（自备，无细胞毒性），中和细胞表面负电荷；③离心后保留 200μL 上清与沉淀混合，避免小体积细胞流失，可使沉淀致密性提升 65%，细胞损失率降至 10% 以下。
5. Q：试剂盒开封后，DCRS 在 4℃避光保存 14 个月，使用时发现死细胞去除率从 90% 降至 65%，是试剂失效了吗？该如何快速验证试剂有效性？
A：DCRS 4℃有效期为 1 年，超期后密度成分易降解。验证方法：①取 1mL DCRS 与 1mL 含 5% FBS 的 PBS 混合，按步骤铺层 1mL 含已知死细胞率（50%）的标准细胞悬液，4℃、700×g 离心 20 分钟；②若离心后活细胞层死细胞率仍＞30%，说明试剂失效；③若死细胞率在 20%-30% 之间，可将 DCRS 用量增加至 2.5mL（常规 2mL），死细胞去除率可提升至 80%，勉强用于基础实验（不建议单细胞测序）。
6. Q：处理含大量红细胞的脾脏单细胞悬液时，离心后活细胞层与红细胞层界限模糊，无法准确吸取活细胞，该如何区分两层边界？
A：界限模糊因红细胞密度与活细胞接近，易混入活细胞层。区分方法：①离心后将离心管置于冰上静置 5 分钟，利用温度差促进红细胞沉降，使边界清晰；②用 100μL 低吸附枪头沿管壁轻轻触碰液面，缓慢下移至 “半透明 - 淡红色过渡区”，此为活细胞层上界，仅吸取上界以下 800μL 液体，避免吸入下方红色红细胞层，可使活细胞纯度提升至 85% 以上。
7. Q：步骤 2 混合细胞悬液与 DCRS 时，吹打过度导致产生大量气泡，离心后气泡黏附在活细胞层表面，影响细胞吸取，该如何消除气泡？
A：气泡会破坏 DCRS 分层结构，消除方法：①混合时用 1mL 低吸附枪头，吸液时缓慢插入液面下（避免吸入空气），吹打次数控制在 5 次以内；②若已产生气泡，将混合液静置 10 分钟，气泡会聚集在液面顶部，用无菌吸管轻轻吸除气泡，再进行铺层；③铺层后在离心管管口覆盖无菌保鲜膜（留 1 个小孔排气），避免离心时气泡扩散，可减少气泡对分层的影响。
8. Q：用户自备的水平离心机最大转速仅 600×g（低于推荐的 700×g），使用时发现死细胞沉降不充分，该如何调整操作弥补转速不足？
A：转速不足需通过延长离心时间和增加 DCRS 用量弥补。调整方法：①将 DCRS 下层用量从 2mL 增加至 2.5mL，增强密度差；②离心时间从 20 分钟延长至 30 分钟，确保死细胞充分沉降；③铺层前将混合液在 4℃静置 15 分钟，预处理促进死细胞初步沉降，可使死细胞去除率从 60% 提升至 80%，满足基础实验需求。
9. Q：步骤 7 用含 5% FBS 的 PBS 重悬细胞时，发现细胞悬液中出现少量白色絮状物（非死细胞），干扰后续细胞计数，该如何去除这些絮状物？
A：白色絮状物多为 DCRS 与 FBS 反应产生的蛋白沉淀（非污染）。去除方法：①重悬后将细胞悬液通过 20μm 细胞筛过滤 1 次，絮状物会被截留；②若过滤后仍有微量絮状物，加入 50μL 0.1% DNase I（自备），37℃孵育 5 分钟，降解可能残留的核酸类絮状物；③过滤后用少量 PBS 冲洗筛网，合并冲洗液，可使细胞悬液澄清度提升 90%，计数误差降至 5% 以下。
10. Q：处理神经细胞单细胞悬液时，按步骤操作后活细胞活性从 80% 降至 55%，是什么原因导致神经细胞活性下降？该如何优化操作保护神经细胞？
A：神经细胞细胞膜脆弱，易受 DCRS 和离心力损伤。优化方法：①步骤 2 重悬细胞时，用含 2% FBS 的 1640 替代常规 RPMI 1640，并加入 50μL 1% BSA（自备），增强神经细胞膜保护；②离心转速降至 650×g（常规 700×g），离心时间缩短至 18 分钟，减少离心力对细胞的冲击；③步骤 5 稀释时用含 10% FBS 的 PBS（常规 5% FBS），补充细胞营养，可使神经细胞活性维持在 70% 以上。