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Muscle Nuclei Isolation Kit
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在高通量单细胞测序中，肌肉组织由于其部分细胞比较大、形状不规则，在进行单细胞油包水实验过程中容易发生堵塞，且细胞膜在解离消化的过程中极易破裂，导致细胞质内容物泄漏和降解。此时单细胞核悬液成为有效的替代方案。
百奥益康肌肉组织细胞核悬液制备试剂盒，专为从肌肉组织中分离高纯度单细胞核而设计。其独特的配方和优化的流程，能够高效地从复杂样本中提取高质量的细胞核悬液，为高通量单细胞测序等前沿研究提供可靠的解决方案。
产品优势
适用范围广：适用于人及其他哺乳动物的肌肉组织样本的细胞核的分离提取，突破传统解离法对样本活性的依赖。
应用场景丰富：可用于单细胞核转录组测序、单细胞ATAC测序等相关实验，助力科研人员深入探索细胞核相关的生物学信息。
性能卓越：制备的单细胞核悬液质量高，细胞核数充足，核膜完整，完全满足单细胞测序等下游实验的严格要求。
数据优异：在测试实验中，使用该试剂盒制备的细胞核悬液的质检结果理想，为高质量的研究数据提供了保障。
实践经验丰富：基于超过10,000个样本、150余种组织类型的组织解离经验开发而成，历经多年实验验证。
测试效果
我们对新鲜的小鼠肌肉组织进行了实验，结果显示百奥益康肌肉组织细胞核悬液制备试剂盒获得的细胞核悬液质量较好，能满足单细胞核转录组测序实验。
测试流程：
测试结果：
利用肌肉组织细胞核悬液制备试剂盒获得的单细胞核悬液质检结果
小鼠肌肉单细胞核悬液镜检图
项目实测
目前我们已完成大量用该细胞核悬液制备试剂盒处理的样本的单细胞核测序项目。
部分项目实测肌肉组织制备单细胞核悬液后数据表现
部分项目实测肌肉组织制备单细胞核悬液后镜检结果
部分项目实测肌肉组织制备单细胞核悬液后单细胞核测序分群表现
注：数据均经对应项目的客户同意后发布
产品宣传页
点击下载：百奥益康肌肉组织细胞核悬液制备试剂盒产品宣传页（货号：BA3315）
产品说明书
点击下载：百奥益康肌肉组织细胞核悬液制备试剂盒使用说明书（货号：BA3315）
订购信息
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产品名称
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产品货号 | 产品规格 | 目录价格 |
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肌肉组织细胞核悬液制备试剂盒
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BA3315-10
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10 rxns | ¥3,500 |
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BA3315-50
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50 rxns | ¥14,000 |
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产品 FAQ
1. Q：这款试剂盒仅适用于哺乳动物肌肉组织吗？对不同类型肌肉组织（如骨骼肌、心肌、平滑肌）的细胞核提取效果是否有差异？能否用于非哺乳动物肌肉组织（如鱼类肌肉）？
A：试剂盒适用于人及其他哺乳动物的骨骼肌、心肌、平滑肌组织，对不同类型肌肉组织的提取效果有轻微差异：心肌和骨骼肌因纤维密度高，研磨时间需延长 1-2 分钟（常规平滑肌研磨 3 分钟，心肌、骨骼肌建议 4-5 分钟），确保组织充分匀浆；平滑肌纤维较疏松，可按常规步骤操作。不适用于非哺乳动物肌肉组织，鱼类等非哺乳动物肌肉细胞的细胞核膜结构与哺乳动物差异大，试剂盒中的裂解液和缓冲体系无法稳定细胞核，易导致细胞核破裂，提取效率极低。
2. Q：说明书要求切取约 200mg 肌肉组织，若组织量不足（如 50mg）或过多（如 300mg），会影响细胞核提取效果吗？该如何调整操作？
A：会影响效果。①组织量不足（＜100mg）：细胞核总量少，后续离心分层时核层不明显，易导致收集遗漏，得率降低 40% 以上；建议将多份 50mg 组织合并（总重量凑至 150-200mg），按常规步骤操作，确保核层清晰。②组织量过多（＞250mg）：研磨时易出现匀浆不均，且裂解液无法充分作用于所有细胞，导致部分细胞核未释放，同时离心时分层紊乱，核层与碎片层混淆；需分两管处理，每管组织量控制在 180-220mg，每管对应 1 次试剂用量，避免因组织过量影响提取效果。
3. Q：步骤 4 和步骤 15 分别用到 40μm 和 10μm 细胞筛，若实验室缺少其中一种筛网，能否用其他孔径筛网替代？例如用 70μm 替代 40μm，或用 20μm 替代 10μm？
A：不可随意替代。①40μm 筛网用于过滤研磨后的组织碎片，若用 70μm 替代，会导致大量纤维碎片未被过滤，后续离心时碎片层增厚，掩盖核层，无法准确收集细胞核；②10μm 筛网用于去除大于细胞核的杂质，若用 20μm 替代，会使部分细胞碎片残留，影响细胞核纯度，进而干扰下游测序实验（如单细胞 ATAC 测序信号偏差）。若缺少 40μm 筛网，需增加研磨时间至 6-7 分钟，确保组织匀浆更细腻，再用 50μm 筛网过滤（效果接近 40μm）；若缺少 10μm 筛网，可将离心后重悬的细胞核悬液静置 5 分钟，吸取上层较清液体（避免底部沉淀杂质），尽量减少碎片残留。
4. Q：步骤 10 离心参数要求 “4℃，3000×g，离心 20 分钟”，且需设置居中的加速度和减速度，若加速度 / 减速度设置过高或离心时间不足（如 15 分钟），会有什么影响？
A：加速度 / 减速度过高会导致离心过程中溶液分层紊乱，核层被冲击分散，无法形成清晰的三层结构，进而导致细胞核收集量减少 50% 以上；必须严格设置为居中档位，避免溶液剧烈扰动。离心时间不足（＜20 分钟）会导致细胞核未充分沉降到 PB2 和 PB3 交界处，核层不完整，部分细胞核仍悬浮在 PB1 层，得率降低 30%-40%；若已离心 15 分钟，需补离心 5 分钟（保持参数不变），不可直接终止操作。
5. Q：步骤 11 收集核层时，如何准确判断核层位置？若误吸到 PB2 层或碎片层，会对后续实验产生什么影响？
A：离心后溶液分三层：上层为碎片层（浑浊，约 1000μL），中层为核层（半透明、略带乳白色，约 400μL，位于 PB2 和 PB3 交界处），下层为 PB3 层（透明）。收集时需用 1mL 移液器，枪头尖贴近液面缓慢插入，仅吸取中层半透明液体，避免触碰上下层。若误吸碎片层，会导致大量细胞碎片混入细胞核悬液，后续计数时杂质干扰大，且测序实验中会出现非特异性信号；若误吸 PB2 层，PB2 中的成分会破坏细胞核膜，导致细胞核破裂，后续无法用于测序或染色实验，需重新提取。
6. Q：试剂盒需 4℃避光保存，若运输过程中冰袋融化，试剂在室温（25℃）放置了 1 小时，还能继续使用吗？长期在室温下保存会有什么后果？
A：室温放置 1 小时可继续使用，但需立即放回 4℃冰箱，且使用前需充分混匀 —— 试剂中的表面活性剂和缓冲成分在室温短期放置（≤1 小时）内稳定性良好，活性损失≤10%，不影响提取效果。长期室温保存（超过 24 小时）会导致：①裂解液活性下降，无法有效破坏细胞膜，细胞核释放量减少；②缓冲液 pH 值变化，无法稳定细胞核膜，离心时细胞核易破裂；③BSA 变质，失去保护作用，细胞核在提取过程中受损，最终得率和活性大幅下降，不可再使用。
7. Q：进行细胞核 RNA 相关实验时，需添加 RNase 抑制剂（终浓度 1U/μL），具体该如何添加？若忘记添加 RNase 抑制剂，会对实验结果产生什么影响？
A：RNase 抑制剂添加方法：所有试剂（裂解液、前悬液、后悬液、PB1-PB3）在使用前，按 “每 1mL 试剂添加 25μL 40U/μL RNase 抑制剂” 的比例加入（1mL×1U/μL÷40U/μL=25μL），充分混匀后再使用。若忘记添加，RNA 会被细胞内残留的 RNase 降解，后续 RNA 相关实验（如单细胞核转录组测序）会出现 RNA 产量极低（不足正常量的 20%）、片段化严重的情况，无法满足实验需求；若已完成研磨步骤才发现遗漏，需立即向匀浆中补加 RNase 抑制剂（按总液体体积计算用量），并缩短后续操作时间，尽量减少 RNA 降解。
8. Q：步骤 14 重悬沉淀时，后悬液的用量该如何根据所需细胞核浓度调整？若重悬体积过大（如 5mL）或过小（如 20μL），会有什么问题？
A：后悬液用量需结合下游实验需求：①若用于单细胞测序（需浓度 1×10⁶-1×10⁷个 /mL），若离心后沉淀约含 5×10⁶个细胞核，需用 500μL-5mL 后悬液（5×10⁶个 ÷1×10⁶个 /mL=5mL，5×10⁶个 ÷1×10⁷个 /mL=500μL）；②若用于细胞核染色（需高浓度），可用 20-50μL 后悬液重悬。重悬体积过大（如 5mL）会导致细胞核浓度过低，后续实验需浓缩，增加操作步骤和污染风险；体积过小（如 20μL）会导致重悬不均，出现细胞核结团，计数不准确，且易堵塞测序芯片通道。
9. Q：质控结束后要求立即进行后续实验，若无法立即开展，制备好的细胞核悬液可短期保存吗？保存条件和时间有什么限制？
A：可短期保存，条件为4℃避光密封保存，时间不超过 0.5 小时，且需避免反复摇晃。保存时需用含 1% BSA 的后悬液将细胞核浓度调整至 1×10⁶-1×10⁷个 /mL，置于低吸附离心管中。